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Título : Cloning, Expression and Characterization of Recombinant, NADH Oxidase from Giardia lamblia
Creador: Castillo Villanueva Adriana
Nivel de acceso: Open access
Palabras clave : Secuencia de Aminoácidos
Clonación Molecular
Escherichia coli - genética
Giardia lamblia - enzimología
Giardia lamblia - genética
Cinética
Datos de Secuencia Molecular
Complejos Multienzimáticos - química
Complejos Multienzimáticos - genética
Complejos Multienzimáticos - aislamiento y purificación Complejos Multienzimáticos - metabolismo
1 NADH, NADPH Oxidoreductases / química 1 NADH, NADPH Oxidoreductasas / genética 1 NADH, NADPH Oxidoreductasas / aislamiento & purificación * 1 NADH, NADPH Oxidoreductases (el metabolismo) 1 Oxidación-Reducción 1 Protozoario Proteínas / química 1 Proteínas Protozoarias (genética) 19. Protozoario Proteínas / aislamiento & purificación * 20. Proteínas Protozoarias (el metabolismo) 2 Proteínas Recombinantes / química 2 Proteínas Recombinantes / genética 2 Proteínas Recombinantes / aislamiento & purificación * 2 Proteínas Recombinantes (metabolismo) 2 Alineación de Secuencia
Amino Acid Sequence
Cloning, Molecular
Escherichia coli - genetics
Giardia lamblia - enzymology
Giardia lamblia - genetics
Kinetics
Molecular Sequence Data
NADH, NADPH Oxidoreductases - genetics
NADH, NADPH Oxidoreductases - isolation & purification
NADH, NADPH Oxidoreductases - metabolism
Oxidation-Reduction
Protozoan Proteins - chemistry
Protozoan Proteins - genetics
Protozoan Proteins - isolation & purification
Protozoan Proteins - metabolism
Recombinant Proteins - chemistry
Recombinant Proteins - genetics
Recombinant Proteins - isolation & purification
Recombinant Proteins - metabolism
Sequence Alignment
Resistencia a las drogas
cinética de enzimas
Estructura enzimática
Metabolismo del oxígeno
Función proteica
Regulación Redox
Drug resistance
Enzyme kinetics
Enzyme structure
Oxygen metabolism
Protein function
Redox regulation
Descripción : La familia de enzimas NADH oxidasas cataliza la oxidación de NADH mediante la reducción de O2 molecular a H2O2, H2O o ambos. En el parásito protozoario Giardia lamblia, la enzima NADH oxidasa (GlNOX) produce H2O como producto final sin producción de H2O2. GlNOX ha sido implicado en el metabolismo del parásito, la regulación redox intracelular y la resistencia a los fármacos actualmente utilizados contra la giardiasis; Por lo tanto, es una proteína interesante desde diversas perspectivas. En este trabajo, el gen GlNOX se amplificó a partir de ADN genómico de G. lamblia y se expresó en Escherichia coli como una proteína His-Tagged; Entonces, la enzima se purificó mediante cromatografía de afinidad de metal inmovilizado, caracterizada, y sus propiedades comparadas con las de la enzima endógena previamente aislada de trofozoítos (Brown et al., Eur J Biochem 241 (1): 155-161, 1996). En comparación con la enzima extraída con trofozoítos, que era escasa e inestable, el sistema de expresión heteróloga recombinante y el método de purificación de un paso producen una preparación proteica estable con alto rendimiento y pureza. La enzima recombinante se parece sobre todo a la proteína endógena; Donde se encontraron diferencias, estas fueron atribuibles a discrepancias metodológicas o artefactos. Esta preparación de proteínas homogénea, pura y funcional puede utilizarse para estudios estructurales o funcionales detallados de GlNOX, lo que proporcionará una comprensión más profunda de la biología y la patogenia de G. lamblia.
The NADH oxidase family of enzymes catalyzes the oxidation of NADH by reducing molecular O2 to H2O2, H2O or both. In the protozoan parasite Giardia lamblia, the NADH oxidase enzyme (GlNOX) produces H2O as end product without production of H2O2. GlNOX has been implicated in the parasite metabolism, the intracellular redox regulation and the resistance to drugs currently used against giardiasis; therefore, it is an interesting protein from diverse perspectives. In this work, the GlNOX gene was amplified from genomic G. lamblia DNA and expressed in Escherichia coli as a His-Tagged protein; then, the enzyme was purified by immobilized metal affinity chromatography, characterized, and its properties compared with those of the endogenous enzyme previously isolated from trophozoites (Brown et al. in Eur J Biochem 241(1):155-161, 1996). In comparison with the trophozoite-extracted enzyme, which was scarce and unstable, the recombinant heterologous expression system and one-step purification method produce a stable protein preparation with high yield and purity. The recombinant enzyme mostly resembles the endogenous protein; where differences were found, these were attributable to methodological discrepancies or artifacts. This homogenous, pure and functional protein preparation can be used for detailed structural or functional studies of GlNOX, which will provide a deeper understanding of the biology and pathogeny of G. lamblia.
Colaborador(es) u otros Autores: Méndez Sara Teresa, Torres-Arroyo Angélica, Reyes-Vivas Horacio, Oria-Hernández Jesús
Fecha de publicación : 2016
Tipo de publicación: Artículo
Formato: pdf
Identificador del Recurso : 10.1007/s10930-015-9643-9
Fuente: Protein Journal 35(1):24 - 33
URI : http://repositorio.pediatria.gob.mx:8180/handle/20.500.12103/2193
Idioma: eng
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