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http://repositorio.pediatria.gob.mx:8180/handle/20.500.12103/2194| Título : | Cloning, expression, purification and characterization of his-tagged human glucose-6-phosphate dehydrogenase: A simplified method for protein yield |
| Creador: | Gómez Manzo, Saúl |
| Nivel de acceso: | Open access |
| Palabras clave : | Cromatografía de Afinidad Glucosafosfato Deshidrogenasa - química Glucosafosfato Deshidrogenasa - genética Glucosafosfato Deshidrogenasa - aislamiento & purificación Glucofosfato Deshidrogenasa - metabolismo Histidina Humanos Estabilidad Proteica Proteínas Recombinantes de Fusión -química Proteínas Recombinantes de Fusión - genética Proteínas Recombinantes de Fusión - aislamiento & purificación Proteínas Recombinantes de Fusión - metabolismo Chromatography, Affinity Glucosephosphate Dehydrogenase - chemistry Glucosephosphate Dehydrogenase - genetics Glucosephosphate Dehydrogenase - isolation & purification Glucosephosphate Dehydrogenase - metabolism Histidine Humans Protein Stability Recombinant Fusion Proteins - chemistry Recombinant Fusion Proteins - genetics Recombinant Fusion Proteins - isolation & purification Recombinant Fusion Proteins - metabolism "Deficiencia de G6PD IMAC proteína función de estabilidad de la proteína estructura de la proteína Proteína recombinante ABB" G6PD deficiency IMAC Protein function Protein stability Protein structure Recombinant protein Abb |
| Descripción : | Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PD) cataliza el primer paso de la pentosa fosfato. En eritrocitos, la funcionalidad de la vía es fundamental para proteger las células contra el daño oxidativo. Deficiencia de G6PD es la enzymopathy más frecuente en los seres humanos con una prevalencia mundial del 4,9%. El cuadro clínico se caracteriza por hemólisis crónica o aguda en respuesta a estrés oxidativo, que se relaciona con la baja actividad celular de G6PD en células de sangre rojas. La enfermedad es heterogénea a nivel genético con cerca de 160 mutaciones descritas, sobre todo las mutaciones de punto que causan sustituciones de aminoácidos individuales. Los estudios bioquímicos destinados a describir los efectos perjudiciales de las mutaciones sobre las propiedades funcionales y estructurales de G6PD humano son indispensables para entender la fisiopatología molecular de esta enfermedad. Por lo tanto, sistemas confiables para la eficiente expresión y purificación de la proteína son altamente deseables. En este trabajo, G6PD humano heterologously fue expresado en Escherichia coli y purificado por cromatografía de afinidad metálica inmovilizados en un sólo paso cromatográfico. La caracterización estructural y funcional indica que su etiquetado G6PD se asemeja a preparaciones anteriores de G6PD recombinante. En contraste con anteriores sistemas de producción de proteínas, nuestro método se basa en recursos comúnmente disponibles y equipo de laboratorio totalmente accesible; por lo tanto, se puede fácilmente implementar. Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) catalyzes the first step of the pentose phosphate pathway. In erythrocytes, the functionality of the pathway is crucial to protect these cells against oxidative damage. G6PD deficiency is the most frequent enzymopathy in humans with a global prevalence of 4.9 %. The clinical picture is characterized by chronic or acute hemolysis in response to oxidative stress, which is related to the low cellular activity of G6PD in red blood cells. The disease is heterogeneous at genetic level with around 160 mutations described, mostly point mutations causing single amino acid substitutions. The biochemical studies aimed to describe the detrimental effects of mutations on the functional and structural properties of human G6PD are indispensable to understand the molecular physiopathology of this disease. Therefore, reliable systems for efficient expression and purification of the protein are highly desirable. In this work, human G6PD was heterologously expressed in Escherichia coli and purified by immobilized metal affinity chromatography in a single chromatographic step. The structural and functional characterization indicates that His-tagged G6PD resembles previous preparations of recombinant G6PD. In contrast with previous protein yield systems, our method is based on commonly available resources and fully accessible laboratory equipment; therefore, it can be readily implemented. © Springer Science+Business Media New York 2013. |
| Colaborador(es) u otros Autores: | Terrón-Hernández Jessica de la Mora-de la Mora Ignacio García-Torres Itzhel López-Velázquez Gabriel Reyes-Vivas Horacio Oria-Hernández Jesús |
| Fecha de publicación : | 2013 |
| Tipo de publicación: | Artículo |
| Formato: | |
| Identificador del Recurso : | 10.1007/s10930-013-9518-x |
| Fuente: | Protein Journal 32(7):585 - 592 |
| URI : | http://repositorio.pediatria.gob.mx:8180/handle/20.500.12103/2194 |
| Idioma: | eng |
| Aparece en las colecciones: | Artículos |
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