Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem: http://repositorio.pediatria.gob.mx:8180/handle/20.500.12103/2195
Título : Cloning, sequencing and functional expression of cytosolic malate dehydrogenase from Taenia solium: Purification and characterization of the recombinant enzyme
Creador: Nava Gabriela
Nivel de acceso: Open access
Palabras clave : Secuencia de aminoácidos
Animales
Secuencia de bases
Dicroísmo circular
Clonación Molecular
Citosol - enzimología
ADN, complementario - química
Estabilidad de la enzima
Regulación Enzimológica de la Expresión Génica
Concentración de iones de hidrógeno
Focalización Isoeléctrica
Cinética
Malato deshidrogenasa - química
Malato deshidrogenasa - genética
Malato deshidrogenasa - aislamiento & purificación
Malato deshidrogenasa - metabolismo
Datos de secuencia molecular
Metabolismo de NAD
Proteínas recombinante - química
Genética de proteínas recombinante
Recombinante de proteínas - aislamiento & purificación
Metabolismo de las proteínas recombinante
Alineamiento de secuencias
Análisis de la secuencia
Taenia solium - enzimología
Taenia solium genética
Amino Acid Sequence
Animals
Base Sequence
Circular Dichroism
Cloning, Molecular
Cytosol - enzymology
DNA, Complementary - chemistry
Enzyme Stability
Gene Expression Regulation, Enzymologic
Hydrogen-Ion concentration
Isoelectric Focusing
Kinetics
Malate Dehydrogenase - chemistry
Malate Dehydrogenase - genetics
Malate Dehydrogenase - isolation & purification
Malate Dehydrogenase - metabolism
Molecular Sequence Data
NAD - metabolism
Recombinant Proteins - chemistry
Recombinant Proteins - genetics
Recombinant Proteins - isolation & purification
Recombinant Proteins - metabolism
Sequence Alignment
Sequence Analysis
Taenia solium - enzymology
Taenia solium - genetics
Taenia solium
Cisticercosis
Malato deshidrogenasa
Metabolismo
Enzima recombinante
Clonación
Taenia solium
Cysticercosis
Malate dehydrogenase
Metabolism
Recombinant enzyme
Cloning
Descripción : El fragmento de cDNA, identificado a partir de la base de datos del proyecto del genoma de T. solium, codifica una proteína de 332 restos de aminoácidos con un peso molecular estimado de 36517 Da. La secuencia de codificación completa de una malato deshidrogenasa citosólica de Taenia solium (TscMDH) Para la expresión recombinante, se clonó la secuencia de codificación de longitud completa en pET23a Después de una expresión exitosa y purificación enzimática, se permitió que la electroforesis en gel de isoelectrofocusación confirmara el valor pI calculado en 8,1, deducido de la secuencia de aminoácidos. TscMDH) mostró una actividad MDH de 409 U / mg En la reducción de oxaloacetato, sin actividad de lactato deshidrogenasa ni selectividad de NADPH. El pH óptimo para la actividad enzimática fue 7,6 para la reducción del oxaloacetato y 9,6 para la oxidación del malato. Los valores de Kcat para oxaloacetato, malato, NAD y NADH fueron 665, 47, 385 y 962 s1, respectivamente. Además, también se informa de una caracterización parcial de la estructura del gen TsMDH después del análisis de un conjunto contig genómico de 1,56 Kb.
We report herein the complete coding sequence of a Taenia solium cytosolic malate dehydrogenase (TscMDH). The cDNA fragment, identified from the T. solium genome project database, encodes a protein of 332 amino acid residues with an estimated molecular weight of 36517Da. For recombinant expression, the full length coding sequence was cloned into pET23a. After successful expression and enzyme purification, isoelectrofocusing gel electrophoresis allowed to confirm the calculated pI value at 8.1, as deduced from the amino acid sequence. The recombinant protein (r-TscMDH) showed MDH activity of 409U/mg in the reduction of oxaloacetate, with neither lactate dehydrogenase activity nor NADPH selectivity. Optimum pH for enzyme activity was 7.6 for oxaloacetate reduction and 9.6 for malate oxidation. Kcat values for oxaloacetate, malate, NAD, and NADH were 665, 47, 385, and 962s-1, respectively. Additionally, a partial characterization of TsMDH gene structure after analysis of a 1.56Kb genomic contig assembly is also reported. © 2011 Elsevier Inc.
Colaborador(es) u otros Autores: Laclette Juan P
Bobes Raúl
Carrero Julio C
Reyes Vivas Horacio
Enriquez Flores Sergio
Mendoza Hernández Guillermod
Plancarte Agustín
Fecha de publicación : 2011
Tipo de publicación: Artículo
Formato: pdf
Identificador del Recurso : 10.1016/j.exppara.2011.03.008
Fuente: Experimental Parasitology 128(3):217 - 224
URI : http://repositorio.pediatria.gob.mx:8180/handle/20.500.12103/2195
Idioma: eng
Aparece en las colecciones: Artículos

Ficheros en este ítem:
No hay ficheros asociados a este ítem.


Los ítems de DSpace están protegidos por copyright, con todos los derechos reservados, a menos que se indique lo contrario.