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Título :	Evaluation of the non-catalytic binding function of Ts26GST a glutathione transferase isoform of Taenia solium
Creador:	Plancarte A
Nivel de acceso:	Open access
Palabras clave :	Glutatión Transferasa - metabolismo Taenia solium - enzimología Glutathione Transferase - metabolism Taenia solium - enzymology Fluorescencia Glutatión S-transferasa Helmintos Cinética Ligandina Taenia solium Fluorescence Glutathione S-transferase Helminths Kinetic Ligandin  Taenia solium
Descripción :	Se observó que la isoforma Taenia solium glutatión transferasa de 26,5 kDa (Ts26GST) se unía no catalíticamente a porfirinas, trans-dienales, ácidos biliares y ácidos grasos, según se evaluó mediante cinética de inhibición, espectroscopia de fluorescencia y ensayos de fluorescencia competitiva con 8-anilino- Naftaleno sulfonato (ANS). La extinción de la fluorescencia intrínseca Ts26GST permitió la determinación de las constantes de disociación (KD) para todos los ligandos. Los datos obtenidos indican que Ts26GST se une a todos los ligandos pero con afinidad diferente. Las porfirinas y los productos de peróxido de lípido inhibieron la actividad catalítica de Ts26GST hasta el 100% en contraste con la inhibición de sólo el 20-30% observada para ácidos biliares y dos ácidos grasos saturados. Se observó inhibición del tipo no competitivo para todos los ligandos inhibidores enzimáticos excepto para trans-trans-2,4-decadienal, que exhibıa una inhibición del tipo no competitiva. El valor constante de disociación KD = 0,7 μM para el ligando de hematina, determinado por ensayos de fluorescencia competitiva con ANS, estaba en buen acuerdo con su valor cinético de inhibición Ki = 0,3 μM y su extinción de fluorescencia intrínseca KD = 0,7 μM. Los ligandos restantes no desplazaron el ANS de la enzima sugiriendo la existencia de diferentes sitios de unión. Además de la actividad catalítica de Ts26GST, los resultados obtenidos sugieren que la enzima presenta una función de ligandina con una amplia especificidad hacia los ligandos no substrato. Taenia solium glutathione transferase isoform of 26.5. kDa (Ts26GST) was observed to bind non-catalytically to porphyrins, trans-trans-dienals, bile acids and fatty acids, as assessed by inhibition kinetics, fluorescence spectroscopy and competitive fluorescence assays with 8-anilino-1-naphthalene sulfonate (ANS). The quenching of Ts26GST intrinsic fluorescence allowed for the determination of the dissociation constants (KD) for all ligands. Obtained data indicate that Ts26GST binds to all ligands but with different affinity. Porphyrins and lipid peroxide products inhibited Ts26GST catalytic activity up to 100% in contrast with only 20-30% inhibition observed for bile acids and two saturated fatty acids. Non-competitive type inhibition was observed for all enzyme inhibitor ligands except for trans-trans-2,4-decadienal, which exhibited uncompetitive type inhibition. The dissociation constant value KD=0.7. μM for the hematin ligand, determined by competitive fluorescence assays with ANS, was in good agreement with its inhibition kinetic value Ki=0.3. μM and its intrinsic fluorescence quenching KD=0.7. μM. The remaining ligands did not displace ANS from the enzyme suggesting the existence of different binding sites.In addition to the catalytic activity of Ts26GST the results obtained suggest that the enzyme exhibits a ligandin function with broad specificity towards nonsubstrate ligands. © 2014 Elsevier Inc.
Colaborador(es) u otros Autores:	Romero Jr Nava G Reyes H Hernández M.
Fecha de publicación :	2014
Tipo de publicación:	Artículo
Formato:	pdf
Identificador del Recurso :	10.1016/j.exppara.2014.02.004
Fuente:	Experimental Parasitology 138(1):63 - 70
URI :	http://repositorio.pediatria.gob.mx:8180/handle/20.500.12103/2404
Idioma:	eng
Aparece en las colecciones:	Artículos

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