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Título :	184 Neurotensina-polyplex como una herramienta potencial en la terapia génica para el cáncer de mama humano 184 Neurotensin-polyplex as a Potential Tool in Gene Therapy for Human Breast Cancer
Creador:	Castillo Rodríguez, Rosa Angélica
Nivel de acceso:	Open access
Palabras clave :	Receptores de Neurotensina - uso terapéutico Receptores de Neurotensina - análisis Receptores de Neurotensina - genética Especificidad de Órganos - genética Ganciclovir - administración & dosificación Ganciclovir - uso terapéutico Supervivencia Celular - genética Muerte Celular - efectos de drogas Ensayos Antitumor por Modelo de Xenoinjerto Ratones Desnudos Neoplasias Mamarias Animales - pathology Neoplasias Mamarias Animales - prevención & control Receptors, Neurotensin - therapeutic use Receptors, Neurotensin - analysis Receptors, Neurotensin - genetics Organ Specificity - genetics Ganciclovir - administration & dosage Ganciclovir - therapeutic use Cell Survival - genetics Cell Death - drug effects Xenograft Model Antitumor Assays Mice, Nude Neoplasias Mamarias Animales - pathology Neoplasias Mamarias Animales - prevención & control Neurotensina Ganciclovir Muerte celular Neurotensin Ganciclovir Cell death
Descripción :	La expresión del receptor de neurotensina (NTS) subtipo 1 (NTSR1) se produce en las células de carcinoma de mama-ductal invasivo, que es el subtipo más común de cáncer de mama en todo el mundo. Recientemente, nuestro grupo ha mostrado el potencial del NTS-polyplex para transfectar genes terapéuticos en células que expresan NTSR1 (patentes mexicanas # 264932 y # 287089; Rubio-Zapata y col., Cancer Gene Ther, 2009, 16: 573-84) . Nuestro trabajo tiene como objetivo demostrar que el NTS-polyplex es capaz de transfectar un gen suicida y causar la muerte celular en el humano-adenocarcinoma MDA-MB-231 células xenoinjerted en ratones atímicos. En primer lugar, se mostró la especificidad de NTS-polyplex-mediada entrega de genes a cultivadas MDA-MB-231 células mediante la internalización y la expresión de ensayos junto con estudios farmacológicos bloqueo. El efecto suicida de la transfección del gen HSVTK y el tratamiento con ganciclovir (GCV) se evaluó utilizando la viabilidad celular y los ensayos de anexina-V. Para los experimentos in vivo, 3 x 106 células MDA-MB-231 fueron sometidas a xenoinjerto subcutáneo en ratones hembra Nu-Nu, de edad 4 semanas. Cuando los tumores alcanzaron un volumen de 100 mm3, los ratones se dividieron en un grupo experimental (n = 3) y control (n = 3). El primer grupo se transfectó con un gen HSVTK y se trató diariamente con GCV (100 mg - kg de peso corporal) para activar el sistema de suicidio. Al final del estudio, los ratones bajo anestesia profunda fueron perfundidos intracardialmente con 50 ml de PBS seguido por 50 ml de paraformaldehído al 4% para diseccionar los tumores para análisis histopatológico. Ambos estudios de RT-PCR e inmunofluorescencia confirmaron la presencia del NTSR1 en las células MDA-MB-231, que fueron capaces de internalizar y expresar específicamente los genes informadores entregados por el poligel de NTS. En estas células, la transfección del gen HSVTK disminuyó la viabilidad celular en un 60%. Este efecto terapéutico específico se reprodujo in vivo. La transfección NTSpolyplex del gen HSVTK y el tratamiento con GCV disminuyeron significativamente el volumen, la tasa de crecimiento y el peso de los tumores MDA-MB-231 en el tiempo en comparación con los controles. En conclusión, nuestros resultados in vitro e in vivo muestran claramente la capacidad de NTS-polyplex para transfectar el gen HSVTK y matar las células MDA-MB-231 de adenocarcinoma de mama humano después de la administración de GCV. Nuestro modelo de terapia génica utilizando NTS-polyplex es muy prometedor en el tratamiento del adenocarcinoma de mama The expression of neurotensin (NTS) receptor subtype 1 (NTSR1) is produced in the cells of invasive breast-ductal carcinoma, which is the most common subtype of breast cancer worldwide. Recently, our group has shown the potential of the NTS-polyplex to transfect therapeutic genes into NTSR1-expressing cells (Mexican patents #264932 and #287089; Rubio- Zapata et al., Cancer Gene Ther, 2009, 16:573−84). Our work aims to demonstrate that the NTS-polyplex is able to transfect a suicide gene and cause cell death in the human-adenocarcinoma MDA-MB-231 cells xenografted in athymic mice. First, we showed the specificity of NTS-polyplex-mediated gene delivery to cultured MDA-MB-231 cells by using internalization and expression assays together with pharmacological blockade studies. The suicide effect of the HSVTK-gene transfection and ganciclovir (GCV) treatment was evaluated by using cell viability and annexin-V assays. For the experiments in vivo, 3 x 106 MDA-MB-231 cells were subcutaneously xenografted in Nu-Nu female mice, age 4 weeks. When tumors reached a 100-mm3 volume, the mice were split into an experimental group (n = 3) and control (n = 3). The former group was transfected with an HSVTK gene and treated daily with GCV (100 mg - kg body weight) to activate the suicide system. At the end of study, the mice under deep anesthesia were intracardially perfused with 50 mL of PBS followed by 50 mL of 4% paraformaldehyde to dissect out the tumors for histopathological analysis. Both RT-PCR and immunofluorescence studies confirmed the presence of the NTSR1 in the MDA-MB-231 cells, which were able to specifically internalize and express reporter genes delivered by the NTS-polyplex. In these cells, the transfection of the HSVTK gene decreased cell viability by 60%. This specific therapeutic effect was reproduced in vivo. The NTSpolyplex transfection of the HSVTK gene and GCV treatment significantly decreased the volume, growing rate, and weight of the MDA-MB-231 tumors over time as compared with the controls. In conclusion, our results in vitro and in vivo clearly show the ability of NTS-polyplex to transfect the HSVTK gene and kill the MDA-MB-231 cells of human breast adenocarcinoma after GCV administration. Our gene therapy model using NTS-polyplex holds great promise in the treatment of breast adenocarcinoma
Colaborador(es) u otros Autores:	Arango-Rodríguez Ml Escobedo L Rubio-Zapata H Tellez-López Vm Mejía-Castillo T Dupouy S Forgez P Martinez-Fong D
Fecha de publicación :	2012
Tipo de publicación:	Artículo
Formato:	pdf
Identificador del Recurso :	10.1016 - S0959-8049(12)70252-6
Fuente:	European Journal of Cancer 48(S1):S93
URI :	http://repositorio.pediatria.gob.mx:8180/handle/20.500.12103/2442
Idioma:	eng
Aparece en las colecciones:	Artículos

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