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http://repositorio.pediatria.gob.mx:8180/handle/20.500.12103/2487| Título : | A simple fluorogenic method for determination of acid ceramidase activity and diagnosis of Farberdisease |
| Creador: | Camacho Castillo, Luz del Carmen |
| Nivel de acceso: | Open access |
| Palabras clave : | Ceramidasa Ácida - análisis Ceramidasa Ácida - Metabolismo Animales Línea Celular Línea Celular Transformada - citología Línea Celular Transformada - metabolismo Línea Celular Transformada - virología Infecciones por Virus de Epstein-Barr - metabolismo Infecciones por Virus de Epstein-Barr - patología Lipogranulomatosis de Farber - diagnóstico Lipogranulomatosis de Farber - metabolismo Fibroblastos - citología fibroblastos - metabolismo Colorantes Fluorescentes - química Tejido Linfoide - citología Tejido linfoide - metabolismo Tejido linfoide - virología Piel - citología Piel -metabolismo Espectrometría de Fluorescencia - métodos Acid Ceramidase - analysis Acid Ceramidase - metabolism Animals Cell Line Cell Line, Transformed - cytology Cell Line, Transformed - metabolism Cell Line, Transformed - virology Epstein-Barr Virus Infections - metabolism Epstein-Barr Virus Infections - pathology Farber Lipogranulomatosis - diagnosis Farber Lipogranulomatosis - metabolism Fibroblasts - cytology Fibroblasts - metabolism Fluorescent Dyes - chemistry Lymphoid Tissue - cytology Lymphoid Tissue - metabolism Lymphoid Tissue - virology Skin - cytology Skin - metabolism Spectrometry, Fluorescence - methods ácida ceramidase, Farber enfermedad, diagnóstico, Ensayo fluorogénico acid ceramidase, Farber disease, diagnosis, fluorogenic assay |
| Descripción : | Ácida ceramidase (aCDase) es una de varias enzimas responsables de la degradación de la ceramida en células de mamíferos. Como tal, la aCDase regula los niveles intracelulares de la ceramida de lípidos bioactivos. Una deficiencia heredada de los resultados de actividad aCDase en la enfermedad de Farber (FD), también llamado lipogranulomatosis, que se caracteriza por la acumulación de ceramida en los tejidos de los pacientes. Diagnóstico de FD se confirma por la demostración de una actividad deficiente de la aCDase y el posterior almacenamiento de la ceramida. Los métodos incluyen análisis extremadamente complejos, muchos de ellos utilizando compuestos radiactivos. Por lo tanto, el ensayo de aCDase y el diagnóstico enzimático in vitro de FD todavía se realizan en sólo un número muy limitado de laboratorios especializados. Aquí, el nuevo substrato fluorógenos Rbm14-12 fue sintetizado y caracterizado como una nueva herramienta para determinar la actividad de aCDase. El ensayo de optimización resultante se realizó en placas de 96 pocillos, y diferente fibroblasto y líneas celulares linfoides derivadas de controles y pacientes FD fueron probadas para medir la actividad aCDase. Como resultado, la actividad de las células de los pacientes del FD fue encontrada para ser muy baja o incluso nula. Este nuevo método fluorógenos ofrece una manera muy fácil y rápida para la determinación específica y exacta de la actividad aCDase y, en consecuencia, para el diagnóstico de FD. Acid ceramidase (aCDase) is one of several enzymes responsible for ceramide degradation within mammalian cells. As such, aCDase regulates the intracellular levels of the bioactive lipid ceramide. An inherited deficiency of aCDase activity results in Farber disease (FD), also called lipogranulomatosis, which is characterized by ceramide accumulation in the tissues of patients. Diagnosis of FD is confirmed by demonstration of a deficient aCDase activity and the subsequent storage of ceramide. Existing methods include extremely complex assays, many of them using radiolabeled compounds. Therefore, the aCDase assay and the in vitro enzymatic diagnosis of FD are still performed in only a very limited number of specialized laboratories. Here, the new fluorogenic substrate Rbm14-12 was synthesized and characterized as a new tool to determine aCDase activity. The resulting optimized assay was performed in 96-well plates, and different fibroblast and lymphoid cell lines derived from FD patients and controls were tested to measure aCDase activity. As a result, the activity in cells of FD patients was found to be very low or even null. This new fluorogenic method offers a very easy and rapid way for specific and accurate determination of aCDase activity and, consequently, for diagnosis of FD. |
| Colaborador(es) u otros Autores: | Bedia C Camacho L Abad JL Fabria S G Levade T. |
| Fecha de publicación : | 2010 |
| Tipo de publicación: | Artículo |
| Formato: | |
| Identificador del Recurso : | doi: 10.1194/jlr.D010033 |
| Fuente: | J Lipid Res 51(12):3542-7 |
| URI : | http://repositorio.pediatria.gob.mx:8180/handle/20.500.12103/2487 |
| Idioma: | eng |
| Aparece en las colecciones: | Artículos |
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