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http://repositorio.pediatria.gob.mx:8180/handle/20.500.12103/2896| Título : | The stability of G6PD is affected by mutations with different clinical phenotypes |
| Creador: | Gómez Manzo, Saúl |
| Nivel de acceso: | Open access |
| Palabras clave : | Glucosafosfato Deshidrogenasa - genetica Deficiencia de Glucosafosfato Deshidrogenasa - enzimología Deficiencia de Glucosafosfato Deshidrogenasa - genética Mutación Glucosephosphate Dehydrogenase - genetics Glucosephosphate Dehydrogenase Deficiency - enzymology Glucosephosphate Dehydrogenase Deficiency - genetics Mutation Deficiencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PD) Variantes Enzimas G6PD recombinantes E. coli deficiente en G6PD Estabilidad de proteínas Termoestabilidad Caracterización estructural NADP estructural + glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency variants recombinant G6PD enzymes G6PD-deficient E. coli protein stability thermostability structural characterization structural NADP+ |
| Descripción : | La deficiencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PD) es la deficiencia enzimática más común en todo el mundo, causando un amplio espectro de condiciones con gravedad clasificada de la más leve (Clase IV) a la más severa (Clase I). Para correlacionar los sitios de mutación en la G6PD con los fenotipos resultantes, estudiamos cuatro variantes de G6PD de origen natural: Yucatán, Nashville, Valladolid y Ciudad de México. Para este propósito, desarrollamos un método exitoso de sobreexpresión que constituye un método más fácil y preciso para obtener y caracterizar estas enzimas. El kcat (constante catalítica) de todas las variantes estudiadas fue menor que en el tipo salvaje. La rigidez estructural podría ser la causa y la consecuencia más evidente de las mutaciones es su impacto sobre la estabilidad y el plegamiento de la proteína, como se puede observar a partir del rendimiento de la proteína, los valores de T50 (temperatura en la que se conserva el 50% de su actividad original) Diferencias en las regiones hidrofóbicas. Las mutaciones correspondientes a fenotipos más severos están relacionadas con la región NADP + estructural. Esto se observó claramente para las variantes de las Clases III y II, que se volvieron más termoestables con NADP + creciente, mientras que las variantes de Clase I permanecieron termolábiles. Las mutaciones producen cargas eléctricas repulsivas que, en el caso de la variante de Yucatán, promueven un aumento del trastorno del extremo C y, en consecuencia, afectan a la unión de NADP +, lo que conduce a la inestabilidad enzimática. Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency is the most common enzyme deficiency worldwide, causing a wide spectrum of conditions with severity classified from the mildest (Class IV) to the most severe (Class I). To correlate mutation sites in the G6PD with the resulting phenotypes, we studied four naturally occurring G6PD variants: Yucatan, Nashville, Valladolid and Mexico City. For this purpose, we developed a successful over-expression method that constitutes an easier and more precise method for obtaining and characterizing these enzymes. The k(cat) (catalytic constant) of all the studied variants was lower than in the wild-type. The structural rigidity might be the cause and the most evident consequence of the mutations is their impact on protein stability and folding, as can be observed from the protein yield, the T50 (temperature where 50% of its original activity is retained) values, and differences on hydrophobic regions. The mutations corresponding to more severe phenotypes are related to the structural NADP+ region. This was clearly observed for the Classes III and II variants, which became more thermostable with increasing NADP+, whereas the Class I variants remained thermolabile. The mutations produce repulsive electric charges that, in the case of the Yucatan variant, promote increased disorder of the C-terminus and consequently affect the binding of NADP+, leading to enzyme instability. |
| Colaborador(es) u otros Autores: | Terrón-Hernández Jessica De la Mora-De la Mora Ignacio González-Valdez Abigail Marcial-Quino Jaime García-Torres Itzhel Vanoye-Carlo America López-Velázquez Gabriel Hernández-Alcántara Gloria Oria-Hernández Jesús Reyes-Vivas Horacio Enríquez-Flores Sergio |
| Fecha de publicación : | 2014 |
| Tipo de publicación: | Artículo |
| Formato: | |
| Identificador del Recurso : | 10.3390/ijms151121179 |
| Fuente: | International journal of molecular sciences 15(11):21179 - 21201 |
| URI : | http://repositorio.pediatria.gob.mx:8180/handle/20.500.12103/2896 |
| Idioma: | eng |
| Aparece en las colecciones: | Artículos |
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